保护作用日本血吸虫与调节Treg/Th17平衡和重编程小鼠糖脂代谢有关

简介

炎症性肠病(IBDs)是一组特发性炎症性肠病，以肠道免疫系统功能紊乱和代谢紊乱为主要特征(张,2020)．IBDs已被世界卫生组织列为现代难治性疾病，其中克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)是两种主要形式(Hodson 2016；娜和文，2019年)．ibd在西方很常见，每百万人中大约有200-300例。过去十年，东方的IBDs发病率飙升，成为一种全球性疾病(Mak等，2020)．然而，安全、耐受良好和有效的IBDs治疗方法仍然缺乏。因此，迫切需要开发具有较少不良反应的新型治疗靶点(娜和文，2019年)．

对清洁的追求和随后肠道蠕虫的减少在IBDs中发挥了重要作用，尽管病例增加的原因尚不完全清楚。免疫因素包括免疫反应失调与IBDs的发病有关(野蛮人,2016)．越来越多的小鼠模型研究表明，感染活蠕虫或暴露于特定的蠕虫衍生成分可降低致病性炎症，这是由于它们的免疫调节能力(Shi等，2022)．裂体吸虫属其活性蛋白在多种免疫疾病中表现出很强的免疫调节能力(Mu等，2021)．已经证明曼氏裂体吸虫鸡蛋可预防2,4,6 -三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的实验性结肠炎(埃利奥特等，2003年)．我们小组和其他人的研究结果表明日本血吸虫鸡蛋也能预防由TNBS引起的实验性结肠炎(莫等人，2007年；赵等，2009)．然而，血吸虫卵下调实验性结肠炎致病反应的潜在免疫机制还有待进一步探索。因此，更好地了解蠕虫对肠道炎症的保护作用对于开发有效和安全的IBDs治疗方法至关重要。

越来越多的研究报道炎性疾病与调节性T (Treg)和辅助性T 17 (Th17)失衡有关(Noack和Miossec, 2014)．ibd的发生和发展与抗炎和促炎细胞因子之间的微妙平衡有关(纽赖特,2014)．Treg/Th17的破坏被认为是IBDs的一个重要原因，其中Treg细胞抑制组织炎症，而Th17细胞代表促炎症亚群(严等，2020年)．可溶性卵细胞抗原(SEA)美国曼可上调糖尿病模型中的Treg细胞(Zaccone等人，2009年)．可溶性蛋白质美国曼在tnbs诱导的小鼠结肠炎中增加转化生长因子-β (TGF-β)和白细胞介素-10 (IL-10)的mRNA表达，同时抑制白细胞介素-17 (IL-17)的表达(Ruyssers等人，2009年)．因此，保护作用裂体吸虫属鸡蛋对免疫介导性疾病的影响不仅与Treg有关，还与Th17有关。是否美国日本血吸虫鸡蛋可以预防实验性结肠炎通过是否调节Treg/Th17平衡，尚未见报道。

近年来，越来越多的研究表明，代谢紊乱通过调节免疫反应来调节IBDs的发病机制(亚丁等，2019年；兰姆等人，2022；Wang等，2022)．此外，葡萄糖和脂质代谢在T细胞的发育和功能中起着重要作用，甚至控制着Th17/Treg (秦等，2022)．事实证明，两者都是美国日本血吸虫感染和SEA导致小鼠葡萄糖和脂质代谢的重编程(徐等，2019；Cai等，2021；Chen等人，2021)．因此，深入了解鸡蛋处理对葡萄糖和脂质代谢变化的影响将有助于揭示IBDs的潜在机制。

基于以上研究结果，本研究观察了美国日本血吸虫在小鼠模型中，TNBS诱导的实验性结肠炎的疾病发展。实验组检测Treg和Th17免疫应答。此外，为了确定卵细胞治疗小鼠实验性结肠炎的确切治疗机制，SEA治疗的T细胞葡萄糖和脂质代谢在体外在小鼠模型的结肠中也进行了探索。

材料与方法

的集合美国日本血吸虫鸡蛋

美国日本血吸虫如前所述，在感染后46天，用1500条尾蚴从兔子肝脏中提取卵子(莫等人，2007年)．收集感染兔子的肝脏并切成小块。然后肝块在冰上的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中均质，过滤，洗涤，以12000 rpm离心15min。离心后的鸡蛋悬浮在PBS中，储存在液氮中以备将来使用。

SEA的制备

SEA的制备方法如前文所述(朱等，2014)．简单地说，将纯化的鸡蛋悬浮在500µL预冷PBS中，加入1 mM苯甲烷磺酰氟(PMSF, Roche Diagnostics)和2 μg/mL Leupeptin (Sigma)，然后用均质机(VirTis Co.)在冰上均质。将悬浮液多次冷冻解冻，在4℃下以12000 rpm离心50 min。上清液经0.22 μm过滤器(Millipore Corporation)过滤后得到SEA。蛋白浓度用BCA蛋白测定试剂盒(Beyotime Biotech, Beijing, China)测定。

小鼠实验性结肠炎的诱导及卵细胞治疗

雌性BALB/c小鼠18只，6-8周龄，购自中国同济医学院实验动物中心。所有小鼠(每笼5只)都被饲养在标准的特定无病原体研究动物设施中，并提供食物和水随意．将小鼠随机分为对照组、TNBS组和TNBS +卵细胞组。TNBS +卵子组小鼠分别于TNBS给药前14天和10天腹腔注射10,000个解冻后死亡的卵子(PBS (100 μ L))，如前所述(埃利奥特等，2003年)．对照组和TNBS组在相应时间腹腔注射等量PBS。第0天，在TNBS组和TNBS +鸡蛋组的小鼠中挑战TNBS (0.5 mg /只小鼠，50%乙醇)以诱导结肠炎。据报道，在急性结肠炎模型中，TNBS直肠内攻毒后的第3天和第7天处死小鼠，因为在这一阶段肠道炎症通常最强烈(Wirtz等人，2017)．一般在5日处死小鼠进行分析^th除非另有说明，TNBS给药后一天。

评估活动量、食欲、体重和脾脏指数

在实验过程中监测各组小鼠的活动和食欲。每天对小鼠称重并记录。通过计算第0天体重变化相对于相应体重的百分比来确定体重变化。计算脾脏重量与相应体重的比例，并在实验结束时记为脾脏指数。

SEA对CD4+ T细胞的刺激在体外

脾脏naïve CD4+ T细胞(CD4⁺CD25⁻CD44⁻CD62L⁺)从TNBS小鼠中分类，如前所述(Bai等人，2021)．Naïve培养CD4+ T细胞(3×10 .⁵用抗cd3单抗(5 μg/mL)和可溶性抗cd28单抗(3 μg/mL)包被96孔板，并在IL-2 (100 U/mL)存在下保存。所有抗体均购自eBioscience。加入SEA(10µg/mL)， PBS作为对照。细胞在RPMI- 1640培养基、10%胎牛血清(FCS)、2 mM l -谷氨酰胺、100 U/mL青霉素/链霉素中培养5天。

结肠炎炎症评估

除体重分析外，结肠炎肠道炎症程度的常规分析方法包括结肠长度、结肠组织苏木精-伊红(HE)染色、组织病理学评分(Wirtz等人，2017)．因此，收集冒号并记录其范围。结肠段近端1.0 cm用4%甲醛固定，石蜡包埋。对he染色切片进行形态测量分析。根据Neurath等人的组织病理学分级系统，两名研究人员采用盲法将损伤程度和结肠炎症从0到4级进行分级(纽ath等人，1995年)．上述评分体系为0 =无炎症，1=低水平白细胞浸润，2 =中水平白细胞浸润，3 =高水平白细胞浸润伴血管密度及壁增厚，4 =透壁白细胞浸润、杯状细胞缺失、高血管密度及壁增厚。

流式细胞分析

流式细胞术检测各组小鼠脾脏中Treg和Th17细胞的比例。简单地说，脾淋巴细胞用淋巴液M (Cedarlane, Ontario, Canada)纯化，染色前用PBS洗涤两次。接下来，抗cd4 - fitc和抗cd25 - pe - cy7表面染色在4°C下进行30 min。4℃固定渗透30 min后，加入抗foxp3 - pe或抗il - 17a - pe抗体，4℃孵育30 min。细胞用BD FACS Calibur分析，数据用FlowJo软件计算。所有抗体均购自加州圣地亚哥eBioscience公司。CD4 +CD25+ Foxp3 +细胞被识别为Treg细胞，CD4 + IL-17 +细胞被识别为Th17细胞。

Western blot分析

用含有蛋白酶抑制剂的低温强裂解缓冲液(Beyotime, China)均质结肠。提取液在8% SDS-PAGE分离，然后转移到聚偏氟乙烯膜上。用含有5%脱脂牛奶的tris缓冲盐水吐温20 (TBST)缓冲液阻断膜，并与以下一抗孵育:兔抗小鼠Foxp3(1:250稀释，Abcam);兔抗小鼠r γt(1:500稀释，Abcam)和兔抗小鼠β-肌动蛋白(1:100稀释，Abcam)。将样品孵育过夜，然后加入辣根过氧化物酶(HRP)偶联抗兔IgG二抗(1:5000稀释，Santa Cruz Biotechnology)。信号被可视化通过根据制造商的协议，增强化学发光(ECL)检测系统(Millipore)。用Image J软件量化蛋白水平，并表示为与β-肌动蛋白的比值。

小鼠细胞因子ELISA

从小鼠血液中采集血清，并像以前一样准备ELISA分析(Guan等，2021)．从所有小鼠和单细胞中制备脾细胞悬液(5×10⁶细胞/孔)在rmi -1640中培养，加入10% FCS和1%青霉素/链霉素(Sigma-Aldrich)。然后在37°C的5% CO中培养₂用SEA(2µg/ml)刺激72 h。小鼠血清或脾细胞上清中TGF-β1、IL-10和IL-17A的浓度根据制造商说明书使用ELISA试剂盒(研发系统)测定。

定量实时聚合酶链反应PCR (qPCR)

用TRIzol收集总RNA^®试剂试剂盒(Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, USA)取自粉碎的结肠或按照制造商说明培养的T细胞。然后产生了cDNA通过高容量cDNA逆转录试剂盒(Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific)。qPCR使用Power Syber Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA)与所列基因特异性引物进行表1．扩增反应以初始保持步骤(95°C for 5 min)进行，随后进行36个三步PCR循环(94°C for 30秒，68°C for 40秒，72°C for 30秒)，最后在72°C进行5分钟延伸。用甘油醛3-磷酸根酶(GAPDH)归一化的比较循环阈值(Ct)与2^−ΔΔCt方法。

统计分析

所有实验数据均以均数±sem表示，并使用SPSS v19.0 (SPSS, Chicago, IL, USA)进行分析。所有在活的有机体内研究重复进行了两次独立的实验在体外实验重复了三次。两组之间的显著性是用学生t检验确定的。多组间比较采用单向多变量方差分析(ANOVA)，然后采用LSD因果测试每两组之间的比较。显著度P< 0.05为显著P< 0.01为极显著。使用GraphPad Prism v.7.0软件生成图形。

结果

的预美国日本血吸虫鸡蛋可减轻tnbs诱导的实验性结肠炎的结肠炎症

与之前的研究一致，在小鼠体内灌注TNBS会导致活动减少、食欲下降、勃起和血便。测定…的效果美国日本血吸虫在鸡蛋结肠炎实验中，我们比较各组体重减轻、结肠长度、脾脏指数和肠道炎症的参数。小鼠体重最初下降，并在3时触底^{理查德·道金斯}TNBS组和TNBS+Egg组在建模后的第2天，TNBS+Egg组逐渐恢复到基线水平，TNBS组仍低于对照组(图1一个)．此外，与TNBS组相比，TNBS+Egg组在3上减重更多^{理查德·道金斯}造型后一天反而加速增重5次^th做模特后的第二天。因此，5^th建模后的第二天被选择进行下面的实验。脾脏肿大及结肠缩短是结肠炎的常见特征性症状(Wirtz等人，2017)．如图1罪犯与对照组相比，TNBS组脾脏肿大，结肠缩短明显。在小鼠模型中，鸡蛋处理导致逆转脾脏增大和结肠缩短的积极趋势。此外，TNBS诱导组织学异常和炎症细胞浸润，而鸡蛋处理的小鼠表现出轻度结肠损伤和炎症细胞浸润减少(图1E, F)．综上所述，预暴露美国日本血吸虫鸡蛋可减轻实验性结肠炎小鼠结肠的损伤性炎症。

的预美国日本血吸虫鸡蛋在tnbs诱导的实验性结肠炎中上调Treg免疫应答

先前的研究强调了Treg反应在免疫稳态中的关键作用，在克罗恩病患者中Treg细胞的数量和抑制功能存在缺陷(克拉夫等人，2020年)．确认是否美国日本血吸虫5 .在tnbs诱导的结肠炎中，我们比较了不同组间脾脏Treg的频率、转录因子和功能性细胞因子^thTNBS模型的第二天。作为图2 a - c结果显示，TNBS组Treg频率较对照组降低，脾脏Foxp3 mRNA表达受到抑制，而鸡蛋组则显著逆转了上述下降趋势。为了验证鸡蛋对TNBS小鼠Treg功能的影响，我们接下来检测了血清和脾细胞上清中功能性细胞因子IL-10和TGF-β1的表达水平。结果(图2 d)显示，TNBS组TGF-β1浓度较对照组低，但IL-10和TGF-β1浓度显著升高美国日本血吸虫结肠炎小鼠中的卵子。综上所述，上述数据暗示预暴露于美国日本血吸虫鸡蛋上调小鼠实验性结肠炎中的Treg免疫应答。

的预美国日本血吸虫鸡蛋下调了tnbs诱导的实验性结肠炎Th17免疫应答

Th17反应与炎症性疾病的发展有关，炎症性疾病是ibd严重发病的基础(亚历山大等人，2022年)．为了探讨鸡蛋处理对小鼠结肠炎Th17免疫应答的作用，我们检测了不同组Th17的频率。与之前的研究一致，TNBS组的脾Th17百分比相对于对照组增加(图3A、B)，同时脾脏中RORγt mRNA表达增强(图3 c)．然而，管理美国日本血吸虫在结肠炎小鼠中，鸡蛋不同程度地抑制了上述参数(图3 a - c)．为了验证鸡蛋处理对结肠炎小鼠Th17功能的影响，接下来我们检测了各组小鼠血清和脾细胞上清中IL-17A的浓度。作为图3D, E表明，与对照组相比，TNBS组IL-17A浓度上调。然而，与鸡蛋接触前恢复了由TNBS给药引起的小鼠IL-17A水平升高。综上所述，我们的研究结果表明，预暴露于美国日本血吸虫在tnbs诱导的实验性结肠炎中，鸡蛋下调了Th17的数量和功能。

保护作用美国日本血吸虫小鼠实验性结肠炎与Treg和Th17平衡有关

鉴于Treg和Th17失衡在炎症性疾病(包括IBDs)中起着至关重要的作用(严等，2020年)，我们询问接受卵子的小鼠脾脏Treg/Th17平衡向Treg反应的转变是否与结肠炎的炎症过程有关。因此，我们研究了3例患者结肠组织的组织学评分及脾脏Treg/Th17比值^{理查德·道金斯}, 5^th，和7^th天后TNBS建模。作为图4A、B如图3所示，TNBS+Egg组的组织学评分高于TNBS组^{理查德·道金斯}日，而5日明显低于TNBS组^thTNBS建模后第7天。然而，Treg/Th17的比值在各组中呈现相反的趋势。此外，实验组Treg/Th17比值与组织学评分呈负相关(图4 c)．因此，这些结果表明，保护作用美国日本血吸虫鸡蛋对小鼠实验性结肠炎的影响与Treg/Th17免疫平衡有关。

SEA对Treg/Th17平衡的调控通过调节葡萄糖和脂质代谢在体外

已经证明裂体吸虫属和裂体吸虫属-衍生产品具有很强的调节宿主体内葡萄糖和脂质代谢的能力(Cai等，2021)．代谢在CD4+细胞分化中起重要作用(查普曼等，2020年；关等，2020年；秦等，2022)，我们假设美国日本血吸虫鸡蛋可能通过调节小鼠实验性结肠炎的代谢来调节Treg/Th17。为了验证我们的假设，我们从TNBS组中筛选出naïve CD4+ T细胞，然后与SEA共同培养在体外，因为SEA是细胞分泌的主要活性成分美国日本血吸虫鸡蛋(徐等，2019)．如图5 a - c与PBS对照相比，SEA可促进Treg扩增，抑制Th17发育，表现为Foxp3 mRNA和蛋白表达升高，RORγt mRNA和蛋白表达降低。为了研究参与这一过程的糖脂代谢相关基因，我们检测了培养细胞中相关基因的mRNA表达。作为图5 d-f提示SEA处理导致糖酵解相关基因(Hypoxia-inducible factor 1α， HIF-1α;原癌基因;丙酮酸激酶同工酶M2型，PKM2)和GLUT1基因(葡萄糖转运体1)，但对其他基因(丙酮酸激酶，PK;磷酸果糖激酶,PFK;GLUT4)和参与这些过程的三羧酸循环(TCA)相关基因(Citrate synthase, CS;异柠檬酸脱氢酶3,IDH3G)。此外，脂肪酸(FA)氧化相关基因(过氧化物酶体增殖物激活受体α， PPARα;肉碱棕榈酰转移酶1;SEA处理显著上调了中链酰基辅酶a脱氢酶(MCAD)，而FA合成基因(脂肪酸合成酶，FAS;硬脂酰辅酶a去饱和酶1 (SCD1)和脂质摄取基因(CD36)经SEA处理后下调(图5胃肠道)．参与这些过程的L-FABP(肝脂肪酸结合蛋白)和ACC(乙酰辅酶A羧化酶)没有表现出任何变化(图5G, H)．综上所述，这些结果证明SEA促进naïve CD4+ T细胞向Treg分化，这与SEA抑制糖酵解途径、促进FA氧化途径的作用有关在体外．

的预美国日本血吸虫鸡蛋可以调节tnbs诱导的结肠炎小鼠结肠组织的糖脂代谢

最近的调查表明美国日本血吸虫感染导致宿主葡萄糖和脂质代谢的重编程，这在蠕虫和炎症疾病之间的对讲中起着重要作用(Yang等，2021；Dai等，2022)．因此，我们探讨了鸡蛋处理对各组大鼠结肠组织肠道糖脂代谢的可能影响。如图6 a - c与对照组相比，TNBS组糖酵解途径相关基因(HIF-1α;原癌基因;PK;PKM2;PFK);糖转运相关基因(GLUT1和GLUT4);TCA相关基因(CS)，虽然与TCA相关的IDH3G基因表达没有明显变化。与TNBS组相比，预暴露于美国日本血吸虫糖酵解途径相关基因和GLUT4在实验性结肠炎小鼠结肠中的表达降低。此外，TNBS可增加FA氧化基因(PPARα;CTP-1;MCAD;L-FABP)、脂肪生成相关基因(FAS;ACC;SCD1)和脂质摄取基因(CD36)在小鼠结肠(图6 d-f)但经鸡蛋处理后，结肠组织中FA氧化基因的上述参数均有不同程度上调，而脂肪生成相关基因和脂质摄取基因的结肠表达则受到抑制。总之，这些结果表明，在实验性结肠炎小鼠的结肠组织中有上调的糖和脂代谢。与上述一致在体外结果，亲曝用美国日本血吸虫鸡蛋会导致TNBS结肠炎结肠中糖脂代谢的重编程。

讨论

本研究旨在探讨其背后的机制美国日本血吸虫鸡蛋对小鼠TNBS结肠炎的急性结肠炎症有一定的缓解作用。研究结果证明了这一点美国日本血吸虫鸡蛋对结肠炎具有保护作用，保护作用与恢复Treg和Th17平衡和重编程糖脂代谢有关。

TNBS结肠炎是急性结肠炎的一个关键模型，并提供了一个类似人类克罗恩病的小鼠模型，以探索IBDs的免疫反应(Wirtz等人，2007年；Wirtz等人，2017)．由于该模型与高度活化T细胞的增加有关，而且这种T细胞在TNBS结肠炎中起着重要作用，因此适用于确定炎症性肠(Wirtz等人，2017)．在活动性结肠炎期间，肠道炎症通常与腹泻和食物摄入量减少有关，因此确定小鼠体重通常对估计结肠炎的严重程度很重要。动物组之间体重曲线的差异通常表明实验组之间结肠炎活性的变化(Wirtz等人，2017)．在本研究中，我们观察到TNBS给药迅速导致严重结肠炎，典型症状为体重急剧下降^圣天和不可恢复的原始重量直到7^th天，伴随着体重最低的3个^{理查德·道金斯}的一天。这些结果与Aharoni等人先前的研究结果一致(Aharoni等人，2005年)和Hollenbach等人(Hollenbach等人，2005年)．

蠕虫可以保护小鼠免受实验性结肠炎(Ruyssers等人，2009年；Shi等，2022)．然而，在本研究中，3日患有结肠炎的小鼠预先接触鸡蛋加剧了体重减轻^{理查德·道金斯}虽然对小鼠死亡率没有影响(数据未显示)。这可能与短暂性损伤有关美国日本血吸虫鸡蛋，因为之前的一项研究报告原位冷冻干燥美国日本血吸虫鸡蛋可导致家兔脑组织出现肉芽肿性炎症(徐等，2013)．从5个^th当模特的第二天，美国日本血吸虫鸡蛋治疗显著地消除了整体疾病表现和炎症参数。这就是本研究选择5的原因^th第二天以TNBS管理为主要检查点。总的来说，与之前的研究一致(埃利奥特等，2003年；莫等人，2007年；Mu等，2021；Shi等，2022)，鸡蛋预处理对小鼠实验性结肠炎有保护作用。

鸡蛋如何调节结肠炎一直是包括我们在内的几个研究小组深入研究的领域。Treg-Th17轴在调节肠道免疫反应中起着重要作用，调节T细胞和效应T细胞之间的平衡被认为是导致IBDs发展的原因(上野等人，2018；严等，2020年)．鉴于Treg-Th17轴在IBDs进展中的重要作用，我们询问了其保护作用美国日本血吸虫与它们对Treg和Th17免疫反应的调节有关。数据表明，TNBS可抑制Treg的频率和功能，增加Th17的频率和功能，这与之前的报道一致(Lim等人，2016)．TNBS引起的结肠炎症最有可能是由于结肠炎期间Treg的下调和Th17分化的上调。但与TNBS小鼠相比，TNBS+Egg小鼠Treg频率和功能上调，Th17频率和功能下调。此外，实验组Treg/Th17比值与组织学评分呈负相关。研究表明，Treg细胞预防自身免疫性疾病的发生主要依赖于影响因子TGF-β和IL-10，而Th17细胞主要通过分泌与IBDs严重程度密切相关的IL-17A来促进自身免疫性和炎症过程(布里顿等人，2019年；严等，2020年)．我们的数据支持，修正的Treg/Th17免疫平衡与保护作用有关美国日本血吸虫小鼠结肠炎中的鸡蛋。鸡蛋如何调节TNBS结肠炎中Treg/Th17反应的详细分子机制有待进一步研究。综上所述，本研究揭示了S．日本血吸虫鸡蛋对tnbs诱导的损伤的抗性与恢复Treg/Th17平衡有关。

越来越清楚的是，T细胞的激活、分化和效应功能与细胞代谢程序密切相关，包括糖酵解、FA合成和线粒体代谢(班托格等人，2018)．有令人信服的证据表明，IBDs的病因可能与各种代谢失调有关(亚历山大等人，2022年；Zheng等，2022)．研究表明，寄生虫衍生的产物对宿主体内的代谢有很强的调节能力(朱等，2014；Cai等，2021；Fisher等人，2021年)．T细胞的分化可以通过调节代谢活性来控制在体外（Chang等人，2013)．因此，我们假设调节美国日本血吸虫Treg-Th17轴上的鸡蛋可能与实验性结肠炎的糖脂代谢有关。

的在体外实验结果表明，刺激卵子的主要活性成分SEA可促进naïve CD4+ T细胞向Treg方向分化，降低糖酵解相关基因(HIF-1α、c-MYC和PKM2)的表达，同时增加FA氧化相关基因的表达。小鼠研究表明，HIF-1α促进Th17，但抑制Treg细胞分化时，幼稚T细胞被激活(Bettelli等人，2006年)．HIF-1α缺失导致糖酵解活性大大降低，从而损害Th17的分化，但促进了Treg的发育(Shi等，2011)．因此，hif -1α依赖的糖酵解途径对Th17和Treg分化的调控至关重要。此外，Myc是T细胞代谢的另一个关键调节因子，它是GLUT1(淋巴细胞中主要的葡萄糖转运体)和糖酵解过程中的PK的转录因子(Gnanaprakasam等人，2017)．据报道，PKM2抑制剂通过抑制PK活性抑制糖酵解和Th17分化，从而减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎的疾病活性(Kono等人，2019年)．因此，转录因子c-Myc的下调对于抑制糖酵解至关重要(秦等，2022)．总的来说，糖酵解途径的减少可以使免疫细胞从促炎状态转变为抗炎状态。

大量研究证明脂质代谢对Treg和Th17的平衡至关重要，其中Treg细胞主要依赖于FA的氧化，而Th17细胞则依赖于FA的合成(Berod等人，2014；王等，2015)．我们的数据表明，SEA不仅促进了FA氧化(PPARα， CPT1和MCAD)，而且还抑制了T细胞的脂质合成(FAS, ACC和SCD1)和脂质摄取(CD36)在体外研究。这种代谢变化促进了Treg的分化，抑制了Th17的发育。几项研究都表明美国日本血吸虫SEA感染和刺激在体外显著提高巨噬细胞中FA氧化相关基因的mRNA水平，但降低与FA合成(FAS, ACC和SCD1)和脂质摄取(CD36)相关的基因(徐等，2019；关等，2020年；Cai等，2021)．我们的结果与以前的报告一致。一项小鼠研究表明，使用CPT1抑制剂治疗后，Treg的分化被抑制(Michalek et al.， 2011)．ACC是关键酶新创脂肪酸合成。Th17细胞分化依赖于acc1介导新创在结肠炎小鼠模型中FA合成和ACC1缺失抑制Th17免疫应答(Mamareli等人，2021年)．据报道，没有糖酵解的帮助，单靠糖酵解是不足以支持Th17细胞分化的新创FA合成(Berod等人，2014；Mamareli等人，2021年)．因此，在本研究中，SEA对Th17分化的抑制与糖酵解和FA合成的降低有关。与效应CD4+ T细胞相比，Treg细胞依赖FA氧化来促进线粒体呼吸(Shi等，2011)．有趣的是，SEA不影响tca相关基因(CS和IDH3G)的表达在体外这需要实验和进一步的研究来阐明。综上所述，SEA对脂质代谢的调节影响CD4+ T细胞的分化，抑制FA合成或促进FA氧化可调节Th17/Treg轴，有利于Treg细胞。

研究证明，细胞内代谢对免疫细胞功能的最终影响不仅受不同代谢途径的平衡影响，还受外界刺激的影响(查普曼等，2020年)．之前的一项研究揭示了这一点美国日本血吸虫感染可诱导小鼠结肠内葡萄糖和脂质代谢的重编程(Yang等，2021)．我们的数据显示，TNBS+Egg组结肠组织中糖酵解途径相关基因和GLUT4基因的表达低于TNBS组。此外，在TNBS结肠炎的结肠中，鸡蛋处理后参与FA氧化的基因表达上调，而与脂肪生成相关的FA合成基因表达降低。这些发现与研究的结果一致在体外本实验通过调节糖脂代谢来评估寄生虫卵在治疗结肠炎中的重要性。

包括我们在内的大量研究已经证实，卵子可以诱导幼稚T细胞向Treg细胞分化，但其背后的复杂机制尚不清楚。据报道，SEA可以预防1型自身免疫性糖尿病通过以TGF-β依赖的方式增加Foxp3的表达，同时上调树突状细胞(DC)上的c型凝集素、IL-10和IL-2。SEA对T细胞和DC的这些作用可能协同作用于NOD小鼠诱导Foxp3+ Treg (Zaccone等人，2009年)．此外，卵子损伤组织释放的炎性细胞因子IL-10、IL-33等可诱导Treg分化(他等人，2018；Bai等人，2021)．的组成美国日本血吸虫卵子抗原非常复杂。评估SEA的哪些成分对Treg具有免疫调节作用将是探索蠕虫源性分子作为新型免疫制剂的先决条件。SEA中的主要抗原糖蛋白ω-1已被证实可诱导依赖TGF-β和维甲酸的幼稚T细胞中Foxp3的表达(Zaccone等人，2011)．另一个小组报道热休克蛋白60 (SjHSP60)，从美国日本血吸虫鸡蛋，驱动两者新创以tlr4依赖的方式诱导和直接扩增先前存在的treg (Zhou等，2018)．虽然我们目前的数据表明鸡蛋或SEA诱导Treg与调节糖脂代谢有关，但需要进一步的研究来探索SEA的活性成分及其在TNBS诱导的实验性结肠炎中鸡蛋诱导Treg的潜在分子机制。

综上所述，本研究提供了新的见解美国日本血吸虫鸡蛋和治疗TNBS结肠炎的潜在机制，重点是Treg和Th17的平衡和重编程糖脂代谢。这些发现为进一步的探索提供了实验依据美国日本血吸虫鸡蛋是治疗IBDs的潜在候选。需要更深入的研究来探索卵子改造糖脂代谢进而调节Treg和Th17免疫平衡的详细分子机制。

数据可用性声明

支持本文结论的原始数据将由作者提供，毫无保留地提供。

道德声明

本实验由华中科技大学同济医学院机构动物关爱利用专业委员会(SCXK2020-0018)审核通过。

作者的贡献

构思设计:JL。进行实验:XH, FZ, WZ, FG。分析数据:XH, WZ, MJ, JL。对材料相关问题有贡献:XH, JH和JL。起草稿件:XH和JL。指导研究:JH, FG, JL。所有作者都对这篇文章做出了贡献，并批准了提交的版本。

资金

国家自然科学基金项目(81772220)和中央高校基本科研业务费专项资金项目(HUST 2016YXMS199)资助。

利益冲突

作者声明，这项研究是在没有任何商业或财务关系的情况下进行的，这些关系可能被解释为潜在的利益冲突。

出版商的注意

本文中所表达的所有主张仅代表作者，并不代表他们的附属组织，也不代表出版商、编辑和审稿人。任何可能在本文中评估的产品，或可能由其制造商提出的声明，都不得到出版商的保证或认可。

参考文献